examen micologic microscopic

Ce trebuie să știm despre examenul micologic microscopic direct?

Dr. Virginia ChițuArticole

Ce este examenul micologic microscopic direct cutanat?

Examenul micologic direct cutanat în microscopie optică este o investigație noninvazivă, relativ ieftină și rapidă, prin care se urmărește găsirea de fungi în piele, lame unghiale, fire de păr, mucoase.

Care este proba care poate fi examinata în cadrul examenului micologic direct?

Pot să fie analizate scuame, fire de păr, fragmente unghiale.

De unde se recoltează proba?

Personal medical instruit, cu noțiuni dermatologice de bază, va alege zona de unde se va face recoltarea în funcție de diagnosticul clinic de trimitere către laborator. Cel mai eficient este ca medicul să indice pe biletul de trimitere zona de unde vrea să se facă recoltarea. Cunoașterea manifestărilor clinice din micozele cutaneo-mucoase, micozelor scalpului (Tinea capitis) și unghiilor ( onicomicoza, Tinea unguium) permite recoltarea din zonele cu încărcarea fungică (micotică) maximă, reducându-se astfel probabilitatea de obținere a rezultatele fals negative.

Unde se poate recolta proba pentru examenul micologic direct?

Se poate recolta într-un serviciu de micologie sau intr-un cabinet dermatologic dotat cu microscop optic si reactivi adecvați. De asemenea poate să fie recoltată de către un medic dermatolog și trimisă către un centru medical unde se poate face analizarea probei. Se recomandă ca proba să fie însoțită de un buletin/document în care să fie precizat diagnosticul clinic prezumtiv, zona de recoltare, descrierea bolii cutanate, tratamente efectuate, bolile de care mai suferă pacientul. Nu se recomandă ca proba să fie recoltată de către pacient deoarece este foarte important ca proba să fie recoltată din aria cu cea mai mare încărcătură fungică (micotică), altfel șansa ca rezultatul să fie fals negativ este foarte mare.

Cum trebuie să se pregătească pacientul pentru examenul micologic direct?

Ideal este ca pacienții să nu înceapă tratamente antimicotice înainte de prelevarea probei.

În cazul pacienților care deja au urmat un tratament antimicotic fără rezultate terapeutice, trebuie să existe o pauză de 1-2 săptămâni până la prelevarea probei! Pe biletul de trimitere către laborator trebuie să se specifice tratamentul antimicotic urmat.

Atunci când pacientul are deja un diagnostic clinic și paraclinic de micoză pentru care urmează deja un tratament antimicotic  și se dorește repetarea examenului micologic direct pentru a se stabili daca s-a obținut vindecarea, nu se oprește tratamentul, dar laboratorul trebuie să fie informat despre această situație.

Pacientul nu trebuie să aplice cu 12-24 ore înaintea examinării la microscop de dezinfectante sau creme emoliente. Folosirea cremelor emoliente reduce cantitatea de scuame făcând dificilă recoltarea probei.

Cum se recoltează proba?

Scuamele se pot recolta cu partea neascuțită a unei lame de bisturiu sau cu o lamă de sticlă.

Fragmentele de lame unghiale se pot recolta cu lama de bisturiu, clește de unghii, foarfecă. De preferat este ca fragmentele unghiale să aibă întreaga grosime a unghiei. Dacă se dorește recoltarea de scuame din aria periunghială și periunghial acestea se vor colecta separat.

Firele de păr este preferabil să se smulgă cu o pensă și nu să se tundă. Daca firele de păr sunt rupte la emergență se vor recolta fire de păr de la periferia ariei afectate.  Examinarea cu lampa Wood poate fi folosită pentru identificarea firelor de păr parazitate (în cazul infecției cu Microsporum spp) care să fie recoltate pentru examinarea la microscopul optic.

Înainte de recoltare în laborator  se dezinfectează cu alcool sanitar 70%.

Cum se transportă proba?

În cazul în care proba este recoltată de către un medic dermatolog, ea poate fi trimisă într-un alt serviciu medical pentru examinare, proba poate fi transportată în condiții sterile:

  • într-o cutie petri
  • plic din hârtie sigilat (staniol/hârtie neagră)

Cât timp pot să fie păstrate probele recoltate?

Fungii pot persista în scuame, fir de păr, unghii o perioadă lungă de timp.

Ce reactanți se folosesc pentru pregătirea probei pentru examinare la microscopul optic și ce rol au ei?

În vederea vizualizării fungilor este nevoie să fie dizolvată keratina, proteina care reprezintă principalul element structural din scuame, fire de păr și respectiv din lamele unghiale. În acest scop proba care urmează să fie analizată la microscop este pusă în contact cu KOH concentrație 10-30% sau DMSO 40% sau amestec de KOH și DMSO. Folosirea soluției de DMSO prezintă avantajul că nu mai necesită încălzirea probei.

Cât durează până când este disponibil rezultatul examenului micologic direct?

Despre examenul micologic direct se spune că rezultatul se obține rapid.

Timpul necesar pentru dizolvarea keratinei

În realitate proba trebuie să stea în contact cu soluția de KOH/DMSO/KOH+DMSO de la 10-15 min pentru scuame. Lamele unghiale necesită un contact mult mai prelungit cu reactanții pentru dizolvarea keratinei, care poate să ajungă și la 12 ore.

Timpul necesar evaluarii la microscopul optic a probei

Timpul examinării probei la microscopul optic depinde de cantitatea de material recoltat, încărcătura fungică a probei, de gradul de dizolvare a keratinei și de experința examinatorului și de performanța microscopului folosit.

Acest timp variază mult de la o probă la alta, existența mai multor probe pentru același pacient crește acuitatea diagnosticului.

Durata examinării poate să fie între 10-30 min. O examinare atentă , este consumatoare de timp, dar face ca rezultatele obținute să fie mult mai credibile.

Timpul de emitere a raportului în format electronic/hârtie depinde de fiecare laborator.

Care sunt factorii care pot influența rezultatul unui examen micologic direct în microscopie optică?

Rezulatele examenului sunt influențate de:

  • Pregătirea pacientului ( a folosit recent creme emoliente, tratamente efectuate recent)
  • locul de recoltare a probei
  • cantitatea de probă obținută
  • tratamente antimicotice efectuate
  • modul de pregătire a probei ( dizolvarea keratinei sub KOH, DMSO, KOH+DMSO)
  • timpul de contact al probei cu reactanții
  • timpul de examinare a probei la microscopul optic

Ce trebuie să cuprindă raportul medical pentru examenul micologic direct efectuat?

Cel mai adesea un asemenea raport precizează dacă testul efectuat este pozitiv sau negativ.

Test pozitiv semnifică prezența fungilor în probă.

Test negativ semnifică absența fungilor.

De asemenea raportul are și o descriere a elementelor fungice identificate: celule levurice, pseudohife, hife, spori.

În cazul rezultatelor pozitve raportul poate conține o imagine cu un câmp microscopic unde există structuri fungice.

De ce este importantă existența unei descrieri detaliate pe raportul examenului micologic direct?

Descrierea elementelor fungice este foarte importantă pentru medic în stabilirea conduitei terapeutice ulterioare.

Prezența unor structuri fungice vegetative precum pseudohife, hife sugerează infecție fungică activa.

Prezența de spori alături de pseudohife, hife semnifică de asemenea infecție fungică activa.

Prezența doar de structuri tip spori fără elemente fungice vegetative nu  pledează pentru infecție fungică activă.

Prezența de rari spori pe probele analizate nu are semnificație patologică.

Ce valoare are un examen micologic direct pozitiv?

Informațiile obținute în urma rezultatului examenului micologic direct întotdeauna trebuie să fie interpretate de către medicul dermatolog în contextul manifestărilor clinice pe care le prezintă pacientul. Nu se tratează un pacient pentru micoză doar pe baza unui rezultat pozitiv, evitându-se astfel erori de diagnostic care să conducă la tratamente inadecvate patologiei pacientului și la stresarea inutilă a pacientului.

Când poate să apară un rezultat fals pozitiv la examenul micologic direct în microscopie optică?

O asemenea situație poate fi consecința:

  • contaminării probei în timpul recoltării sau prelucrării
  • interpretării eronate a structurilor de pe lamele vizualizate la microscop, de exemplu conturul corneocitelor (celulele pielii prezente în scuame, unghii, fir de păr) poate mima hife, bulele de aer sau fragmentele de corneocite pot mima spori.

Ce valoare are un examen micologic negativ?

Un rezultat negativ va fi interpretat în context clinic.

Un rezultat negativ poate semnifica:

  • absența infecției fungice
  • rezultat fals negativ

Dacă clinicianul are alte argumente solide pentru susținerea diagnosticului de micoză el poate iniția tratament antimicotic de probă.

Când poate apare un rezultat fals negativ al examenului micologic direct?

O asemenea situație poate apare dacă:

  • proba a fost redusă cantitativ
  • recoltarea s-a efectuat dintr-o zonă săracă în fungi
  • prepararea probei a fost deficitară
  • timpul de examinare a probei a fost mic
  • lipsa de experiență a examinatorului
  • tratament antimicotic recent

Cine poate face examenul micologic direct cutanat?

Examinarea probelor la microscopul optic poate fi efectuată de către medici microbiologi, biologi sau dermatologi cu training adecvat.
Interpretarea rezultatelor obținute în urma examenului micologic direct va fi efectuată întotdeauna de către medicul dermatolog, ele trebuie să fie interpretate în cadrul tabloului clinic al pacientului.

Galerie imagini

Elemente fungice vegetative. Examen microsccopic. Micoza cutanata
Elemente fungice vegetative observate la examenul micologic microscopic direct într-o micoză cutanată
Candidoza cutanata. Examen micologic direct. Imagine
Imagine caracteristică pentru o candidoza cutanată obținută la examenul micologic direct
Pitiriazisul versicolor. Imagine examen micologic microsccopic.
Imagine obținută prin examen micologic microscopic direct în Pitiriazisul versicolor
Corneocite. Hife. Microscop
Marginile corneocitelor pot fi confundate cu hife, confuzie responsabilă pentru rezultatele fals pozitive